Protokoll: NHS-Ester-Markierung von Aminobiomolekülen

NHS-Ester (N-Hydroxysuccinimidester) und andere aktivierte Ester (Sulfo-NHS, Sulfotetrafluorophenyl — STP) sind reaktionsfähige Verbindungen, die für die Modifizierung von Aminogruppen geeignet sind. NHS-Ester sind die am weitesten verbreitete Art von aktivierten Estern.

Übliche Modifizierungen sind Fluoreszenzfarbstoffe, Fluoreszenzlöscher (Quencher) und andere Reportergruppen. Alkingruppen und Azidogruppen können unter Verwendung aktivierter Ester angefügt werden, um Biomoleküle für die Click-Chemie nutzbar zu machen.

Da Aminogruppen praktisch immer in Proteinen und Peptiden vorliegen, ist die Modifizierung dieser Biopolymere besonders weit verbreitet. Andere Beispiele sind Amino-Oligonukleotide, aminomodifizierte DNA und aminhaltige Zucker.

Die Reaktion von NHS-Estern mit Aminen ist stark pH-abhängig: Bei einem niedrigen pH-Wert ist die Aminogruppe protoniert, wodurch keine Modifizierung stattfinden kann. Bei einem höheren als dem optimalen pH-Wert kommt es zur schnellen Hydrolyse des NHS-Esters, sodass die Ausbeute der Modifizierung sinkt. Der optimale pH-Wert für die Modifizierung liegt bei 8,3–8,5.

Wasser ist das am weitesten verbreitete Lösungsmittel für die Markierung. Wenn der NHS-Ester schwer löslich ist, kann er in DMSO bzw. DMF aufgelöst und zu der wässrigen Proteinlösung (pH 8,3–8,5) zugegeben werden. Beachten Sie, dass das DMF keine Amine enthalten darf und somit geruchlos sein muss.

Wir empfehlen folgendes Protokoll für die Markierung von Biomolekülen mit von Lumiprobe hergestellten NHS-Estern:

  1. Berechnen Sie die benötigte Menge an NHS-Ester:
    NHS_Ester_Gewicht [mg] = 8 × Amino_Verbindung_Gewicht [mg] × NHS_Ester_Molekülmasse / Amino_Verbindung_Molekülmasse
    8 ist der Molüberschuss an NHS-Ester. Hierbei handelt es sich um einen experimentellen Wert für die Monomarkierung, der für zahlreiche verbreitete Proteine und Peptide geeignet ist. In einigen Fällen ist es jedoch erforderlich, mehr oder weniger NHS-Ester zu verwenden. Dies ist abhängig von der Proteinstruktur, dem Reagenz und der Löslichkeit. Die Molekülmasse von Erzeugnissen von Lumiprobe ist auf den entsprechenden Produktseiten zu finden.
    Um zum Beispiel 3 mg BSA (Molekülmasse 69.300) mit einem Cyanin 5 NHS-Ester (Molekülmasse 592) zu markieren und die maximale Ausbeute an einfach markiertem Produkt zu erhalten, muss man 8 × 3 mg × 592 / 69.300 = 0,21 mg des Cyanin 5 NHS-Esters einsetzen.
  2. Bestimmen Sie das Volumen des Reaktionsgemisches. Die Markierung kann in einer beliebigen Größenordnung von Nanomolen bis Dutzenden Gramm erfolgen. Dabei sollte man ein Mindestvolumen von 10–20 µl nicht unterschreiten. Höhere Konzentrationen des Aminobiomoleküls (1−10 mg/ml Endkonzentration) sind optimal.
  3. Lösen Sie den NHS-Ester in 1/10 des Reaktionsvolumens an DMF oder DMSO auf. Aminfreies DMF ist hierbei das bevorzugte Lösungsmittel. Nach der Reaktion kann der NHS-Ester in Lösung ein bis zwei Monate bei −20 °C aufbewahrt werden.
  4. Lösen Sie das Biomolekül in 9/10 des Reaktionsvolumens an Puffer mit einem pH-Wert von 8,3–8,5 auf.
    0,1 M Natriumbicarbonatlösung hat einen geeigneten pH-Wert. Eine Alternative ist 0,1 M Phosphatpuffer. Beachten Sie, dass der pH-Wert von entscheidender Bedeutung ist. Vermeiden Sie die Verwendung von aminhaltigen Puffern (TRIS-Puffer kann manchmal eingesetzt werden, wird aber nicht empfohlen).
    Bei Markierungen im großen Maßstab (Hunderte Milligramm von NHS-Ester) ist zu beachten, dass die Lösung aufgrund der Hydrolyse von NHS-Ester über die Zeit dazu tendiert anzusäuern. Kontrollieren Sie in diesem Fall den pH-Wert beziehungsweise verwenden sie einen konzentrierteren Puffer.
  5. Geben Sie die NHS-Ester-Lösung zu der Biomolekül-Lösung hinzu und schütteln Sie gut. Inkubieren Sie das Reaktionsgemisch über Nacht auf Eis oder mindestens vier Stunden bei Raumtemperatur.
  6. Reinigen Sie das Konjugat unter Verwendung eines geeigneten Verfahrens: Gelfiltration wird für Makromoleküle am häufigsten angewandt. Alternativen sind Ausfällung und Chromatografie. Organische Verunreinigungen (wie zum Beispiel N-Hydroxysuccinimid, NHS-Ester, durch Hydrolyse hergestellte Säure) lassen sich fast immer problemlos abtrennen. Bei Proteinen und Nukleinsäuren können Ethanol- oder Acetonfällung angewandt werden.

Related products

Azidobuttersäure-NHS-Ester

Aktivierter Ester zum Anfügen einer Azidgruppe an Peptide und Proteine
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
53720 50 mg $60.00 Auf Lager
63720 100 mg $95.00 Auf Lager
73720 1 g auf Anfrage Auf Lager
83720 5 g auf Anfrage Auf Lager

BDP 558/568 NHS-Ester

BDP 558/568 ist ein gelb emittierender Fluorophor. Ebenso wie andere BDP-Farbstoffe zeichnet sich dieser Fluorophor durch eine hohe Fluoreszenzquantenausbeute, starke Helligkeit und Photostabilität aus.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
17420 1 mg $110.00 Auf Lager
27420 5 mg $210.00 Auf Lager
47420 25 mg $410.00 Auf Lager
57420 50 mg $695.00 5 Tage
67420 100 mg $1190.00 Auf Lager

BDP FL NHS-Ester

Aminreaktiver BDP FL, ein heller und photostabiler Fluorophor für FAM-Kanäle.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
11420 1 mg $110.00 Auf Lager
21420 5 mg $210.00 Auf Lager
41420 25 mg $410.00 Auf Lager
51420 50 mg $695.00 Auf Lager
61420 100 mg $1190.00 Auf Lager

BDP R6G NHS-Ester

BDP R6G ist ein Bordipyrromethen-Fluorophor, dessen Absorptions- und Emissionsspektren denen von Rhodamin R6G ähneln.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
14420 1 mg $110.00 Auf Lager
24420 5 mg $210.00 Auf Lager
44420 25 mg $410.00 Auf Lager
54420 50 mg $695.00 Auf Lager
64420 100 mg $1190.00 Auf Lager

Cyanin 3 NHS-Ester

Aminreaktiver Cyanin-3-Farbstoff NHS-Ester.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
11020 1 mg $110.00 Auf Lager
21020 5 mg $210.00 Auf Lager
41020 25 mg $410.00 Auf Lager
51020 50 mg $695.00 Auf Lager
61020 100 mg $1190.00 Auf Lager

Cyanin 3.5 NHS-Ester

NHS-Ester-Derivat des Cyanin-3.5-Farbstoffs
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
12020 1 mg $110.00 Auf Lager
22020 5 mg $210.00 Auf Lager
42020 25 mg $410.00 Auf Lager
52020 50 mg $695.00 Auf Lager
62020 100 mg $1190.00 Auf Lager

Cyanin 5 NHS-Ester

Aminreaktiver Cyanin-5-Ester für die Markierung von Proteinen, Peptiden und anderen Molekülen.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
13020 1 mg $110.00 Auf Lager
23020 5 mg $210.00 Auf Lager
43020 25 mg $410.00 Auf Lager
53020 50 mg $695.00 Auf Lager
63020 100 mg $1190.00 Auf Lager

Cyanin 5.5 NHS-Ester

Cyanin 5.5 NHS-Ester ist ein aminreaktiver Farbstoff im Rot/NIR-Bereich.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
17020 1 mg $110.00 Auf Lager
27020 5 mg $210.00 Auf Lager
47020 25 mg $410.00 Auf Lager
57020 50 mg $695.00 Auf Lager
67020 100 mg $1190.00 Auf Lager

Cyanin 7 NHS-Ester

Aminreaktiver NHS-Ester des NIR-Farbstoffes Cyanin 7
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
15020 1 mg $110.00 Auf Lager
25020 5 mg $210.00 Auf Lager
45020 25 mg $410.00 Auf Lager
55020 50 mg $695.00 Auf Lager
65020 100 mg $1190.00 Auf Lager

Cyanin 7.5 NHS-Ester

Aminreaktiver NHS-Ester des NIR-Fluoreszenzfarbstoffes Cyanin 7.5.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
16020 1 mg $110.00 Auf Lager
26020 5 mg $210.00 Auf Lager
46020 25 mg $410.00 Auf Lager
56020 50 mg $695.00 Auf Lager
66020 100 mg $1190.00 Auf Lager

FAM NHS-Ester, 6-Isomer

N-Hydroxysuccinimidylester von Fluorescein (FAM), reines 6-Isomer
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
15120 1 mg $110.00 Auf Lager
25120 5 mg $160.00 Auf Lager
45120 25 mg $210.00 Auf Lager
55120 50 mg $270.00 Auf Lager
65120 100 mg $420.00 Auf Lager

Hexinsäure-NHS-Ester

Alkin-NHS-Ester zur Markierung von Biomolekülen mit einer Alkingruppe für die kupferkatalysierte Click-Chemie
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
41720 25 mg $95.00 Auf Lager
51720 50 mg $180.00 Auf Lager
61720 100 mg $290.00 Auf Lager
91720 1 g auf Anfrage Auf Lager

Pentinsäure-STP-Ester

Ein aktivierter Ester für die Alkinylierung von Peptiden/Proteinen.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
30720 10 mg $110.00 5 Tage
40720 25 mg $210.00 5 Tage
50720 50 mg $410.00 5 Tage
60720 100 mg $695.00 21 Tage

Pyrenbuttersäure NHS-Ester

Pyren NHS-Ester für die Markierung von Biomolekülen. Pyren ist ein fluoreszierender Abstandssensor, der Excimere bildet, und außerdem eine Ankergruppe für die Immobilisierung von Graphit.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
63520 100 mg $110.00 5 Tage

Sulfo-Cyanin 3 NHS-Ester

Wasserlöslicher aktivierter Ester von Cyanin 3 für die Markierung von Amino-Biomolekülen
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
11320 1 mg $110.00 Auf Lager
21320 5 mg $210.00 Auf Lager
41320 25 mg $410.00 Auf Lager
51320 50 mg $695.00 Auf Lager
61320 100 mg $1190.00 Auf Lager

Sulfo-Cyanin 5 NHS-Ester

Wasserlöslicher Sulfo-Cyanin 5 Succinimidylester
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
13320 1 mg $110.00 Auf Lager
23320 5 mg $210.00 Auf Lager
43320 25 mg $410.00 Auf Lager
53320 50 mg $695.00 Auf Lager
63320 100 mg $1190.00 Auf Lager

Sulfo-Cyanin 5.5 NHS-Ester

Wasserlösliche, sulfonierte Form des fernroten Fluorophors Cyanin 5.5 als NHS-Ester für die Bindung an Aminogruppen
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
17320 1 mg $110.00 Auf Lager
27320 5 mg $290.00 Auf Lager
47320 25 mg $690.00 Auf Lager
57320 50 mg $1190.00 Auf Lager
67320 100 mg $1850.00 Auf Lager

Sulfo-Cyanin 7 NHS-Ester

Sulfo-Cyanin 7 NHS-Ester ist ein wasserlöslicher, aminreaktiver NIR-Farbstoff.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
15320 1 mg $110.00 Auf Lager
25320 5 mg $290.00 Auf Lager
45320 25 mg $690.00 Auf Lager
55320 50 mg $1270.00 Auf Lager
65320 100 mg $1990.00 Auf Lager

Sie haben den Artikel in den Warenkorb gelegt.. Warenkorb ansehen oder zur Kasse gehen
Die eingegebene Zahl ist falsch..