Rechner für die DNA-Quantifizierung

Dieser Rechner dient der schnellen und einfachen Quantifizierung doppelsträngiger DNA mit unserem Pico488 DNA-Quantifizierungskit. Die lineare Regression kann auch unabhängig davon für andere Quantifizierungen genutzt werden. Die Verdünnungsreihe und Empfehlungen passen außerdem zum geläufigsten der dsDNA-Quantifizierungsreagenzien, zum Quant-iT® PicoGreen® dsDNA-Quantifizierungskit.

Fluorescence - background, a.u.

Concentration, pg/µL

Küvettenvolumen: µL
Das Küvettenvolumen sollte >=1 µl sein.

1. Vorbereitung von Puffer- und Pico488-Gebrauchslösungen

• Verdünnen Sie 592 µL der 20× TE-Puffer-Stammlösung (Komponente des Kits) mit 11.248 ml ddH₂O, um 1× ТЕ-Puffer herzustellen.
• Verdünnen Sie nach dem Auftauen der Pico488-Stammlösung (Komponente des Kits) 200-fach mit 1× ТЕ-Puffer. (Pico488 ist auch separat als Quantifizierungsreagenz erhältlich.)
• Mischen Sie die Lösung und setzen Sie sie innerhalb der nächsten drei Stunden ein.

2. Herstellung der Standardverdünnungsreihe

• Mischen SieNehmen Sie einer ng/µL dsDNA-Standardlösung Die Konzentration sollte >= 2 ng/µL betragen. (eine 100 ng/µL dsDNA-Lösung ist Teil des Kits) mit 1× TE-Puffer, um eine 2 ng/µL dsDNA-Stammlösung herzustellen.
• Verdünnen Sie diese dsDNA-Stammlösung gemäß der folgenden Tabelle weiter mit 1× TE-Puffer und geben Sie die Pico488-Gebrauchslösung hinzu.

  #	1× ТЕ-Puffer, µL	dsDNA-Stammlösung	Pico488-Gebrauchslösung, µL	finale dsDNA-Konzentration, pg/µL

3. Probenverdünnung und Fluoreszenzmessung

• Mischen Sie µL Ihrer DNA-Probe mit 1× TE-Puffer und geben Sie der Pico488-Gebrauchslösung hinzu. Mischen Sie und inkubieren Sie die Lösung für 5 min.
• Messen Sie die Fluoreszenzintensität der Standardverdünnungsreihe und Ihrer DNA-Probe(n) in einem Fluorometer. Das Absorptionsmaximum von Pico488 liegt bei 503 nm, das Emissionsmaximum bei 525 nm.

  #	Konzentration, pg/µL		Fluoreszenz-intensität	Standardkurve
  	Standardreihe
  #1
  	DNA-Probe	verdünnte DNA-Probe