Rechner für die DNA-Quantifizierung

Dieser Rechner dient der schnellen und einfachen Quantifizierung doppelsträngiger DNA mit unserem PreciseGreen DNA-Quantifizierungskit. Die lineare Regression kann auch unabhängig davon für andere Quantifizierungen genutzt werden. Die Verdünnungsreihe und Empfehlungen passen außerdem zum geläufigsten der dsDNA-Quantifizierungsreagenzien.

Küvettenvolumen: µL

1. Vorbereitung von Puffer- und PreciseGreen-Gebrauchslösungen

  • Verdünnen Sie 592 µL der 20× TE-Puffer-Stammlösung (Komponente des Kits) mit 11.248 ml ddH2O, um 1× ТЕ-Puffer herzustellen.
  • Verdünnen Sie nach dem Auftauen der PreciseGreen-Stammlösung (Komponente des Kits) 200-fach mit 1× ТЕ-Puffer. (PreciseGreen ist auch separat als Quantifizierungsreagenz erhältlich.)
  • Mischen Sie die Lösung und setzen Sie sie innerhalb der nächsten drei Stunden ein.

2. Herstellung der Standardverdünnungsreihe

  • Mischen Sie einer ng/µL dsDNA-Standardlösung (eine 100 ng/µL dsDNA-Lösung ist Teil des Kits) mit 1× TE-Puffer, um eine 2 ng/µL dsDNA-Stammlösung herzustellen.
  • Verdünnen Sie diese dsDNA-Stammlösung gemäß der folgenden Tabelle weiter mit 1× TE-Puffer und geben Sie die PreciseGreen-Gebrauchslösung hinzu.
    #1× ТЕ-Puffer, µLdsDNA-StammlösungPreciseGreen-Gebrauchslösung, µLfinale dsDNA-Konzentration, pg/µL

3. Probenverdünnung und Fluoreszenzmessung

  • Mischen Sie µL Ihrer DNA-Probe mit 1× TE-Puffer und geben Sie der PreciseGreen-Gebrauchslösung hinzu. Mischen Sie und inkubieren Sie die Lösung für 5 min.
  • Messen Sie die Fluoreszenzintensität der Standardverdünnungsreihe und Ihrer DNA-Probe(n) in einem Fluorometer. Das Absorptionsmaximum von PreciseGreen liegt bei 503 nm, das Emissionsmaximum bei 525 nm.
    #Konzentration, pg/µLFluoreszenz-intensitätStandardkurve
    Standardreihe
    #1  
     DNA-Probeverdünnte DNA-Probe
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