FAM-dT-Phosphoramidit

Fluorescein (FAM) Oligonukleotidsynthese Phosphoramidite

Artikel-Nr.	Packungseinheit	Preis	Vorlaufzeit
13460	100 mg	–	Auf Lager
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Dieses Phosphoramidit dient dem Einbau der FAM-Modifikation an einer beliebigen Stelle eines Oligonukleotids während Phosphoramidit-Synthese (intern, am 5’-Ende, dem 3’-Ende). Dieses Reagenz ist ein Konjugat aus Desoxythymidinphosphoramidit und dem 6-Isomer des Fluorophors FAM. Die Modifikation erfolgt während der Oligonukleotidsynthese, indem Standard-dT-Phosphoramidit durch FAM-dT-Phosphoramidit ersetzt wird. Die Exonuklease- sowie Polymeraseaktivität werden dabei nicht unterdrückt.

Für die 5’-Markierung von Oligonukleotiden nutzen Sie das 6-Isomer des Fluorescein-phosphoramidits.

Anwendungsempfehlungen:

Kopplungszeit: 10 Minuten.

Das Entschützen erfolgt unter Standardbedingungen mit Ammoniak; die Dauer hängt dabei von den vorliegenden Nukleinbasen und ihren Schutzgruppen ab (das Entschützen für 17 Stunden bei 55 °C entfernt alle Schutzgruppen von den Standardnukleinbasen). Alternativ kann man dafür auch AMA verwenden, eine 1:1-Mischung aus 30%igem Ammoniak und 40%igem wässrigem Methylamin. Dabei entsteht allerdings zu 5 % ein nicht fluoreszierendes Nebenprodukt. Um die Entstehung dieses Nebenprodukts zu vermeiden, beginnen Sie das Entschützen zunächst nur mit 30%igem Ammoniak (30 Minuten bei Raumtemperatur), fügen Sie dann dasselbe Volumen an 40%igem wässrigem Methylamin hinzu und setzen Sie das Entschützen wie mit AMA gewohnt fort (beispielsweise 10 Minuten bei 65 °C).

Struktur von Fluorescein-dT-Phosphoramidit

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Absorptions- und Emissionsspektren von FAM

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Allgemeine Eigenschaften

Erscheinungsform:	gebrochen weißer Feststoff
Molekülmasse:	1423.54
Molekülformel:	C₇₉H₈₇N₆O₁₇P
Löslichkeit:	gut in Acetonitril, DCM
Qualitätskontrolle:	NMR ¹H, NMR ³¹P, HPLC-MS
Lagerungsbedingungen:	Lagerung: 12 Monate nach Wareneingang bei −20 °C im Dunkeln. Transport: bei Raumtemperatur bis zu drei Wochen. Längere Lichteinwirkung vermeiden. Trocken lagern.
Sicherheitsdatenblatt:	herunterladen
	Product specifications

Spektrale Eigenschaften

Anregungs-/Absorptionsmaximum / nm:	492
ε / L⋅mol⁻¹⋅cm⁻¹:	74000
Emissionsmaximum / nm:	517
Fluoreszenz-Quantenausbeute:	0.93
CF₂₆₀:	0.22
CF₂₈₀:	0.17

Verdünnungsmittel:

Acetonitril

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