Fluo-4 AM, grüner fluoreszierender Calcium-Indikator

Neurowissenschaft Fluorometrie Mikroskopie Durchflusszytometrie
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Fluo-4 AM ist ein zellgängiger Ca2+-Indikator, der durch intrazelluläre Esterasen metabolisiert wird und bei Bindung an Ca2+ ein helles grünes Fluoreszenzsignal erzeugt (Anregung/Emission λ bei 494/506 nm). Fluo-4 AM wird zur Quantifizierung intrazellulärer Ca2+ verwendet. Er eignet sich sehr gut für fluorometrische und bildgebende Anwendungen wie Mikroskopie, Durchflusszytometrie, Spektrofluorometrie und fluorometrische Hochdurchsatz-Mikrotiterplatten-Screening-Assays [1].

Fluo-4 AM weist eine ähnliche Struktur und spektrale Eigenschaften wie der weit verbreitete Ca2+-Indikator Fluo-3 auf, hat jedoch gewisse Vorteile gegenüber Fluo-3, wie eine hellere Fluoreszenzemission, eine hohe Durchlässigkeit für Zellen und eine Kd für Ca2+ in Pufferlösung von 345 nM. Aufgrund seiner höheren Fluoreszenzintensität kann Fluo-4 AM bei niedrigeren intrazellulären Konzentrationen verwendet werden, was seine Verwendung für lebende Zellen weniger toxisch macht.

Da Fluo-4 AM nicht kovalent an zelluläre Komponenten bindet, kann es aktiv durch organische Anionentransporter aus der Zelle transportiert werden. Die In-vivo-Zellbildgebung mit Fluo-4 AM wird in der Regel innerhalb von ein oder zwei Stunden nach der Beladung durchgeführt, aber der Farbstoff kann bei Bedarf erneut auf die Zellen geladen werden. Fluo-4 AM kann auch durch EDC/EDAC in situ fixiert werden, um anschließende Immunfluoreszenzstudien durchzuführen.

Fluo-4 AM weist eine geringe Löslichkeit in Wasser auf. Es wird empfohlen, eine 1 mM Stammlösung in DMSO vor der Beladung der Zellen herzustellen. Verwenden Sie eine Endkonzentration von 1-5 μM und inkubieren Sie bei 37 °C für 15-60 Minuten als Ausgangspunkt für Ihr Protokoll.


[1] Gee K.R. et al. Chemical and physiological characterization of fluo-4 Ca(2+)-indicator dyes. Cell Calcium. 2000. 27(2). 97-106.
HEK-293-Zellen wurden mit dem Ca<sup>2+</sup>-Fluoreszenzindikator Fluo-4 AM (1892-x, 3 μM) beladen. Oben sind Bilder von Zellen im Ruhezustand und zum Zeitpunkt der Erzeugung von Ca<sup>2+</sup>-Signalen als Reaktion auf die Stimulation mit Acetylcholin (ACh, 1 μM) zu sehen. Unten ist eine repräsentative Registrierung der Ca<sup>2+</sup>-Zellantworten (in Rot auf dem Foto hervorgehoben) auf die Stimulation mit Acetylcholin (1 μM) und Ionomycin (5 μM) zu sehen. Die Zeitpunkte und Dauer der Substanzenanwendung sind durch horizontale Segmente über der experimentellen Kurve gekennzeichnet.
Fluo-4 AM, grüner fluoreszierender Calcium-Indikator, 1892-50ug
Fluo-4 AM, grüner fluoreszierender Calcium-Indikator, 1892-50ug
Fluo-4 AM, grüner fluoreszierender Calcium-Indikator, 1892-50ug
Struktur von Fluo-4 AM
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Absorptions- und Emissionsspektren von Fluo-4 AM (calciumgebundene Form)

Absorptions- und Emissionsspektren von Fluo-4 AM (calciumgebundene Form)

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Allgemeine Eigenschaften

Erscheinungsform: orangerotes Pulver
Molekülmasse: 1096.95
CAS-Nummer: 273221-67-3
Molekülformel: C51H50F2N2O23
IUPAC-Name: N-[4-[6-[(Acetyloxy)methoxy]-2,7-difluoro-3-oxo-3H-xanthen-9-yl]-2-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]phenyl]-N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]glycine (acetyloxy)methyl ester
Löslichkeit: gut in DMSO
Qualitätskontrolle: NMR 1H und HPLC-MS (≥95 %)
Lagerungsbedingungen: 24 Monate ab dem Wareneingang bei −20 °C an einem lichtgeschützten Ort. Transport: bei Raumtemperatur bis zu drei Wochen. Trocken lagern.
Sicherheitsdatenblatt: herunterladen
Product specifications

Spektrale Eigenschaften

Anregungs-/Absorptionsmaximum / nm: 494
Emissionsmaximum / nm: 518
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