Fluo-4 AM, grüner fluoreszierender Calcium-Indikator
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Fluo-4 AM ist ein zellgängiger Ca2+-Indikator, der durch intrazelluläre Esterasen metabolisiert wird und bei Bindung an Ca2+ ein helles grünes Fluoreszenzsignal erzeugt (Anregung/Emission λ bei 494/506 nm). Fluo-4 AM wird zur Quantifizierung intrazellulärer Ca2+ verwendet. Er eignet sich sehr gut für fluorometrische und bildgebende Anwendungen wie Mikroskopie, Durchflusszytometrie, Spektrofluorometrie und fluorometrische Hochdurchsatz-Mikrotiterplatten-Screening-Assays [1].
Fluo-4 AM weist eine ähnliche Struktur und spektrale Eigenschaften wie der weit verbreitete Ca2+-Indikator Fluo-3 auf, hat jedoch gewisse Vorteile gegenüber Fluo-3, wie eine hellere Fluoreszenzemission, eine hohe Durchlässigkeit für Zellen und eine Kd für Ca2+ in Pufferlösung von 345 nM. Aufgrund seiner höheren Fluoreszenzintensität kann Fluo-4 AM bei niedrigeren intrazellulären Konzentrationen verwendet werden, was seine Verwendung für lebende Zellen weniger toxisch macht.
Da Fluo-4 AM nicht kovalent an zelluläre Komponenten bindet, kann es aktiv durch organische Anionentransporter aus der Zelle transportiert werden. Die In-vivo-Zellbildgebung mit Fluo-4 AM wird in der Regel innerhalb von ein oder zwei Stunden nach der Beladung durchgeführt, aber der Farbstoff kann bei Bedarf erneut auf die Zellen geladen werden. Um die zelluläre Lokalisierung des Farbstoffs zu bestimmen, kann Fluo-4 AM in situ mit EDC/EDAC fixiert und immunochemisch mit Anti-BAPTA-Antikörpern [2] gegengefärbt werden.
Fluo-4 AM weist eine geringe Löslichkeit in Wasser auf. Es wird empfohlen, eine 1 mM Stammlösung in DMSO vor der Beladung der Zellen herzustellen. Verwenden Sie eine Endkonzentration von 1-5 μM und inkubieren Sie bei 37 °C für 15-60 Minuten als Ausgangspunkt für Ihr Protokoll.
[1] Cell Calcium. 2000. 27(2). 97-106. [2] Cell Calcium. 1997. 21(3). 175-183.
Produkt in Aktion
HEK-293-Zellen wurden mit dem Ca2+-Fluoreszenzindikator Fluo-4 AM (1892-x, 3 μM) beladen
Absorptions- und Emissionsspektren von Fluo-4 AM (calciumgebundene Form)
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Allgemeine Eigenschaften
| Erscheinungsform: | orangerotes Pulver |
| Molekülmasse: | 1096.95 |
| CAS-Nummer: | 273221-67-3 |
| Molekülformel: | C51H50F2N2O23 |
| IUPAC-Name: | N-[4-[6-[(Acetyloxy)methoxy]-2,7-difluoro-3-oxo-3H-xanthen-9-yl]-2-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]phenyl]-N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]glycine (acetyloxy)methyl ester |
| Löslichkeit: | gut in DMSO |
| Qualitätskontrolle: | NMR 1H und HPLC-MS (≥95 %) |
| Lagerungsbedingungen: | 24 Monate ab dem Wareneingang bei −20 °C an einem lichtgeschützten Ort. Transport: bei Raumtemperatur bis zu drei Wochen. Trocken lagern. |
| Sicherheitsdatenblatt: | herunterladen |
| Product specifications |
Spektrale Eigenschaften
| Anregungs-/Absorptionsmaximum / nm: | 494 |
| Emissionsmaximum / nm: | 518 |
Zitierungen
- Turchaninova, E.; Robustova, S.; Kovalenko, S.; Dzhabrailov, V.; Dolgodvorova, A.; Romanova, S.; Zybin, D.; Popov, M.; Miftakhova, A.; Frolova, S.; Slotvitsky, M.; Romanov, A.; Agladze, K.; Tsvelaya, V. Refining Fibroblast-to-Cardiomyocyte Transdifferentiation Protocols to Explore Emergent Self- Organization in Cardiac Cultures. Research Square, 2025, preprint. doi: 10.21203/rs.3.rs-7186257/v1
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