DAPI, blau fluoreszierender Nukleinsäurefarbstoff
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DAPI (4′,6-Diamidino-2-Phenylindol) ist ein blau fluoreszierender Farbstoff, der stark an Adenin-Thymin-reiche Regionen in der DNA bindet. Es wird weit in der Fluoreszenzmikroskopie, Durchflusszytometrie und Chromosomenfärbung als Kerngegenfärbung verwendet. DAPI wird häufig eingesetzt, um fixierte Zellen zu färben, da der Farbstoff membranundurchlässig ist, obwohl der Farbstoff in lebende Zellen eindringen kann, wenn er in hohen Konzentrationen verwendet wird.
Bei Bindung an doppelsträngige DNA zeigt DAPI eine etwa 20-fache Verstärkung der Fluoreszenz mit einem Absorptionsmaximum bei 355 nm und einem Emissionsmaximum bei 460 nm. DAPI bindet auch an RNA, obwohl er in dem Fall nicht so stark fluoresziert. Wenn er an RNA gebunden ist, verschiebt sich sein Emissionsspektrum auf etwa 500 nm.
Es gibt eine leichte Fluoreszenzüberlappung zwischen DAPI und grün fluoreszierenden Molekülen wie Fluorescein und GFP. Eine spektrale Entmischung wird empfohlen, wenn eine äußerst präzise Bildanalyse erforderlich ist. DAPI ist vielfach empfindlicher als Ethidiumbromid für die Färbung von DNA in Agarosegelen. Es kann zum Photofootprinting von DNA und zum Nachweis von angelagerten Sonden in Blotting-Anwendungen eingesetzt werden, indem der doppelsträngige Komplex spezifisch sichtbar gemacht wird. Außerdem ist die DAPI-Färbung eine sensitive und spezifische Nachweismethode für Mykoplasmen.
Absorptions- und Emissionsspektren von DAPI
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| Erscheinungsform: | gelber Feststoff bzw. Lösung |
| Molekülmasse: | 350.25 |
| CAS-Nummer: | 28718-90-3 |
| Molekülformel: | C16H17Cl2N5 |
| Löslichkeit: | gut löslich in DMF, DMSO |
| Qualitätskontrolle: | NMR 1H und HPLC-MS (≥95 %) |
| Lagerungsbedingungen: | 24 Monate ab dem Wareneingang bei −20 °C an einem lichtgeschützten Ort. Transport: bei Raumtemperatur bis zu drei Wochen. Trocken lagern. |
| Sicherheitsdatenblatt: | herunterladen |
| Product specifications |
Spektrale Eigenschaften
| Anregungs-/Absorptionsmaximum / nm: | 355 |
|
ε |
28800 |
| Emissionsmaximum / nm: | 460 |
Zitierungen
- Potapenko, E.Y..; Kashko, N.D.; Knorre, D.A. Spontaneous Mutations in Saccharomyces cerevisiae mtDNA Increase Cell-to-Cell Variation in mtDNA Amount. International Journal of Molecular Sciences, 2023, 24(24), 17413. doi: 10.3390/ijms242417413
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