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ProteOrange Protein-Quantifizierungskit

Das fluoreszenzbasierte ProteOrange Protein-Quantifizierungskit erlaubt eine wesentlich empfindlichere Proteinbestimmung als bestehende spektrophotometrische und andere herkömmliche Methoden zur Quantifizierung von Proteinmengen (Lowry, Bradford, BCA).

Hauptbestandteil des Kits ist der Farbstoff ProteOrange, der in freier Form nur schwach fluoresziert. In Gegenwart von Proteinen kommt es zur Bildung von Farbstoff-Protein-Komplexen, in denen der Farbstoff eine ausgeprägte Fluoreszenz zeigt. Das Absorptionsmaximum des an Proteine gebundenen ProteOrange liegt bei ~485 nm, das Emissionsmaximum bei ~590 nm. Das Kit eignet sich für jedes Fluorometer, das über eine entsprechende Anregungslichtquelle und einen Detektionskanal verfügt. Im Allgemeinen ist der Messbereich der Proteinkonzentrationen durch die Empfindlichkeit des Geräts beschränkt. Der empfohlene Messbereich liegt zwischen 10 ng/ml und 10 µg/ml für Messungen mit einem Küvetten-Fluorometer und zwischen 100 ng/ml und 10 µg/ml für Messungen mit einem Mikroplatten-Fluorometer.

Im Kit sind der Farbstoff ProteOrange, ein Puffer zur Herstellung der Farbstoffarbeitslösung sowie ein Proteinstandard (BSA, 2 mg/ml) enthalten. Für die Proteinbestimmung setzt man eine Farbstoffarbeitslösung an und verdünnt damit die zu untersuchenden Proben und Proben mit bekannter Proteinkonzentration zur Erstellung einer Kalibrationskurve. Die Herstellung der Proteinstandards erfolgt entweder mit im Kit enthaltenem BSA oder mit dem zu bestimmenden Protein, falls dieses zur Verfügung steht. Die angesetzten Proben werden zur Proteindenaturierung 10 min bei 95 °С inkubiert und nach Abkühlen auf Raumtemperatur gemessen.

Das Material im Kit reicht abhängig vom Probenvolumen für bis zu 250 Messungen (bei einem Probenvolumen von 2 ml für eine Standard-Küvette) bzw. bis zu 2500 Messungen (bei einem Probenvolumen von 200 µl für eine 96-Well-Platte).