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Mitochondriales Membranpotential-Apoptose-Kit, mit LumiTracker® Mito Red CMXRos und Annexin V-AF 488

Dieses Kit ist für einen schnellen und bequemen Test von zwei Schlüsselindikatoren der Apoptose ausgelegt: der Externalisierung von Phosphatidylserin (Annexin V-AF 488) und Veränderungen des mitochondrialen Membranpotentials (LumiTracker^® Mito Red CMXRos).

Annexin V (oder Annexin A5) gehört zur Annexin-Familie von intrazellulären Proteinen, die Phospholipide binden. Es wird häufig verwendet, um apoptotische Zellen zu erkennen, da es spezifisch an Phosphatidylserin bindet, das während der frühen Stadien der Apoptose von der inneren auf die äußere Schicht der Plasmamembran wandert. Dieses Kit enthält rekombinantes Annexin V, konjugiert mit AF 488, einem hellen, photostabilen grünen Fluorophor mit spektralen Eigenschaften ähnlich denen von FITC.

LumiTracker^® Mito Red CMXRos ist ein kationischer, rot-fluoreszierender Farbstoff, der passiv über die Plasmamembran diffundiert und sich basierend auf ihrem Membranpotential selektiv in aktiven Mitochondrien anreichert. Gesunde Zellen haben ein hohes mitochondriales Membranpotential, und dessen Abnahme wird als Marker des frühen Stadiums der Apoptose betrachtet.

Nach dem Färben einer Zellpopulation mit Annexin V-AF 488 und LumiTracker^® Mito Red CMXRos in dem mitgelieferten Bindungspuffer zeigen lebende Zellen minimale grüne und intensive rote Fluoreszenz. Im Gegensatz dazu zeigen apoptotische Zellen grüne Fluoreszenz und reduzierte rote Fluoreszenz. Diese verschiedenen Zellpopulationen können leicht mit einem Durchflusszytometer unterschieden werden, wobei beide Farbstoffe durch die 488 nm-Linie eines Argon-Ionen-Lasers angeregt werden.