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Annexin V-AF 488 Apoptose-Kit, mit Propidiumiodid

Annexin V (oder Annexin A5) ist ein Protein der Annexin-Familie, intrazellulären Phospholipid-bindenden Proteinen. Annexin V geht mit Phosphatidylserin eine spezifische calciumabhängige Bindung an und wird deshalb üblicherweise in der Durchflusszytometrie und Fluoreszenzmikroskopie zur Bestimmung apoptotischer Zellen angewendet. Die Methode wurde zuerst von Koopman et at. (1994) beschrieben [1].

In einer gesunden Zelle findet man Phosphatidylserin (PS) nur in der cytosolischen Seite der Plasmamembran. Während der Apoptose heben Zellen die Membranasymetrie auf und transportieren PS in die äußere Membranhälfte, wo es durch fluoreszenzmarkiertes Annexin V gebunden werden kann. Die Methode erlaubt zusammen mit anderen in-vitro Farbstoffen wie Propidiumiodid (PI) eine Unterscheidung zwischen gesunden (Annexin⁻PI⁻), apoptotischen (Annexin⁺PI⁻) und nekrotischen (Annexin⁺PI⁺) Zellen [2].

Das Kit ist gebrauchsfertig und enthält alle Reagenzien, die zur Markierung apoptotischer Zellen mittels mit AF 488 konjugiertem Annexin V und PI benötigt werden.

Bei AF 488 handelt es sich um ein sulfoniertes Rhodamin, einen hellen, photostabilen und hydrophilen Fluorophor. Der Farbstoff emittiert im grünen Bereich des Spektrums. Seine spektralen Eigenschaften sind denen von FITC ähnlich. Absorptionsmaximum — 495 nm. Emissionsmaximum — 519 nm.

PI ist ein nicht-membrangängiger DNA-Farbstoff, der eine Unterscheidung zwischen nekrotischen, apoptotischen und gesunden Zellen auf Grund der Membranintegrität erlaubt. Nach der Bindung an DNA emittiert der Farbstoff im rot-orangenen Bereich des Spektrums. Absorptionsmaximum — 535 nm. Emissionsmaximum — 617 nm.

[1] Koopman G. et al. Annexin V for flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on B cells undergoing apoptosis. Blood. 1994. 84(5). P.1415-1420.

[2] Martin S.J. et al. Early redistribution of plasma membrane phosphatidylserine is a general feature of apoptosis regardless of the initiating stimulus: inhibition by overexpression of Bcl-2 and Abl. J Exp Med. 1995. 182(5). P.1545-1556.