Fluo-4 AM, grüner fluoreszierender Calcium-Indikator
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Fluo-4 AM ist ein zellgängiger Ca2+-Indikator, der durch intrazelluläre Esterasen metabolisiert wird und bei Bindung an Ca2+ ein helles grünes Fluoreszenzsignal erzeugt (Anregung/Emission λ bei 494/506 nm). Fluo-4 AM wird zur Quantifizierung intrazellulärer Ca2+ verwendet. Er eignet sich sehr gut für fluorometrische und bildgebende Anwendungen wie Mikroskopie, Durchflusszytometrie, Spektrofluorometrie und fluorometrische Hochdurchsatz-Mikrotiterplatten-Screening-Assays [1].
Fluo-4 AM weist eine ähnliche Struktur und spektrale Eigenschaften wie der weit verbreitete Ca2+-Indikator Fluo-3 auf, hat jedoch gewisse Vorteile gegenüber Fluo-3, wie eine hellere Fluoreszenzemission, eine hohe Durchlässigkeit für Zellen und eine Kd für Ca2+ in Pufferlösung von 345 nM. Aufgrund seiner höheren Fluoreszenzintensität kann Fluo-4 AM bei niedrigeren intrazellulären Konzentrationen verwendet werden, was seine Verwendung für lebende Zellen weniger toxisch macht.
Da Fluo-4 AM nicht kovalent an zelluläre Komponenten bindet, kann es aktiv durch organische Anionentransporter aus der Zelle transportiert werden. Die In-vivo-Zellbildgebung mit Fluo-4 AM wird in der Regel innerhalb von ein oder zwei Stunden nach der Beladung durchgeführt, aber der Farbstoff kann bei Bedarf erneut auf die Zellen geladen werden. Fluo-4 AM kann auch durch EDC/EDAC in situ fixiert werden, um anschließende Immunfluoreszenzstudien durchzuführen.
Fluo-4 AM weist eine geringe Löslichkeit in Wasser auf. Es wird empfohlen, eine 1 mM Stammlösung in DMSO vor der Beladung der Zellen herzustellen. Verwenden Sie eine Endkonzentration von 1-5 μM und inkubieren Sie bei 37 °C für 15-60 Minuten als Ausgangspunkt für Ihr Protokoll.
[1] Gee K.R. et al. Chemical and physiological characterization of fluo-4 Ca(2+)-indicator dyes. Cell Calcium. 2000. 27(2). 97-106.
Absorptions- und Emissionsspektren von Fluo-4 AM (calciumgebundene Form)
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| Erscheinungsform: | orangerotes Pulver |
| Molekülmasse: | 1096.95 |
| CAS-Nummer: | 273221-67-3 |
| Molekülformel: | C51H50F2N2O23 |
| IUPAC-Name: | N-[4-[6-[(Acetyloxy)methoxy]-2,7-difluoro-3-oxo-3H-xanthen-9-yl]-2-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]phenyl]-N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]glycine (acetyloxy)methyl ester |
| Löslichkeit: | gut in DMSO |
| Qualitätskontrolle: | NMR 1H und HPLC-MS (≥95 %) |
| Lagerungsbedingungen: | 24 Monate ab dem Wareneingang bei −20 °C an einem lichtgeschützten Ort. Transport: bei Raumtemperatur bis zu drei Wochen. Trocken lagern. |
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| Product specifications |
Spektrale Eigenschaften
| Anregungs-/Absorptionsmaximum / nm: | 494 |
| Emissionsmaximum / nm: | 518 |
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