Einige Inhalte auf dieser Seite sind in deutscher Sprache nicht verfügbar und werden automatisch in derzeit verfügbarer Sprache angezeigt.

Окрашивание ретикулоцитов с помощью LumiCell® Reticulocyte Stain

Ретикулоциты представляют собой незрелые красные клетки крови, образующиеся в костном мозге и поступающие в периферическую кровь, где они созревают в эритроциты. Увеличение или уменьшение количества ретикулоцитов может указывать на активность эритропоэза или его недостаточность, в частности, на нарушения, связанные с анемиями и дисфункцией костного мозга.

У млекопитающих ретикулоциты, как и зрелые эритроциты, лишены клеточного ядра, но в них присутствуют остаточные органеллы (рибосомы и митохондрии) и содержащиеся в них РНК и ДНК. Этот признак отличает ретикулоциты от зрелых эритроцитов. Красители нуклеиновых кислот, такие как LumiCell® Reticulocyte Stain, выявляют сетчатую структуру рибосомной РНК (рРНК) в ретикулоцитах, и позволяют визуально их отличать от зрелых эритроцитов. Также окрашивание LumiCell® Reticulocyte Stain позволяет дифференцировать глазами стадию созревания ретикулоцитов — новые клетки содержат больше РНК, чем зрелые ретикулоциты, имеющие низкое содержание РНК.

Принцип метода

LumiCell® Reticulocyte Stain (также известен как BD Retic-Count® reagent) представляет собой готовый к использованию раствор для определения числа ретикулоцитов в периферической крови человека. Тиазоловый оранжевый связывается с рРНК и ДНК, образуя флуоресцентный комплекс с поглощением при 509 нм и испусканием при 532 нм. LumiCell® Reticulocyte Stain подходит как для микроскопии, так и для проточной цитометрии.

Биоматериал

Кровь должна быть собрана в вакуумные пробирки с ЭДТА. Для наилучшего результата окрашивание лучше производить в течение 24 часов после сбора биоматериала. Антикоагулированную кровь можно хранить при комнатной температуре (20-25°C) в течение 24 часов до окрашивания.

Дополнительные материалы, не поставляемые с реагентом:

  • Натрий-фосфатный буфер 1× (PBS)

Процедура окрашивания

  1. Подготовьте две пробирки: для контроля и непосредственно образца.
  2. Добавьте в пробирку для контроля 2,5 мкл цельной крови-ЭДТА и 0,5 мл PBS, аккуратно перемешайте вортексированием.
  3. Добавьте в пробирку для образца 0,5 мл красителя LumiCell Reticulocyte Stain и 2,5 мкл цельной крови-ЭДТА, аккуратно перемешайте вортексированием.
  4. Инкубируйте пробирки в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте.
  5. Окрашенный образец готов для микроскопии или проточной цитофлуориметрии.

Важно! Измерения должны быть проведены не позднее чем через 3 часа после инкубации Хранение образцов допустимо только в темноте. Непосредственно перед измерением содержимое пробирки необходимо аккуратно перемешать вортексированием.

Важно! При использовании проточного цитофлуориметра необходимо установить логарифмическую шкалу по FSC и SSC.

Примечание

  • Согласно литературным данным процентное содержание ретикулоцитов в крови составляет 0,9-2,1 %. Новорожденные дети младше двух недель имеют более высокие показатели [1].
  • У некоторых пациентов с очень высоким количеством ретикулоцитов маркеры, установленные с помощью неокрашенной пробирки, могут иметь более 0,3% положительных событий. В таких случаях маркер все равно должен быть установлен у основания неокрашенного пика.
  • Реагент LumiCell Reticulocyte Stain не следует использовать с образцами гемолизированной крови.
  • Пациенты с макротромбоцитами (гигантскими тромбоцитами) могут давать аномальные результаты при использовании LumiCell Reticulocyte Stain. Количество ретикулоцитов у пациентов с макротромбоцитами должно быть подтверждено альтернативным методом
  • LumiCell Reticulocyte Stain реагент является нуклеотидным маркером. Он окрашивает включения в эритроцитах, содержащие ДНК или РНК. Примерами таких включений являются ядра нормобластов (NRBCs), Тельца Жолли (тельца Хауэлла-Жолли), кольца Кебота, малярийные паразиты и т. д. При слишком большом значении содержания ретикулоцитов следует использовать дополнительный референсный метод, например, анализ мазка периферической крови с окрашиванием по Райту-Гимзе.
  • У пациентов с повышенным уровнем лейкоцитов (как это бывает при хроническом лимфолейкозе) лимфоциты будут детектироваться вместе с эритроцитами. Для пациентов с повышенным количеством лейкоцитов, количество ретикулоцитов должно быть подтверждено альтернативным методом.
  • У пациентов, получающих лечение эритропоэтином, может повышаться процент ретикулоцитов. У некоторых пациентов также может наблюдаться повышенное количество нормобластов (NRBC) в периферической крови, что может мешать оценке ретикулоцитов. Наличие или отсутствие NRBCs можно подтвердить с помощью анализа мазка периферической крови, окрашенного по Райту-Гимзе.

[1] Williams W, Beutler E, Erslev A, Lichtman M. Hematology. 4th ed. New York: McGraw-Hill; 1990.

LumiCell® — зарегистрированная торговая марка Lumiprobe.

BD Retic-Count® — зарегистрированная торговая марка Becton, Dickinson and Company.

Ähnliche Produkte

LumiCell-Retikulozyten-Färbung

LumiCell Retikulozyten-Färbemittel ist eine gebrauchsfertige Thiazol-Orange-Lösung zur Bestimmung des Prozentsatzes von Retikulozyten im menschlichen peripheren Blut mit Mikroskopie und Durchflusszytometrie.
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
17410 50 mL $115 Auf Lager
Großmengen-Anfrage
Einen günstigeren Preis gefunden? Lassen Sie es uns wissen und wir unterbreiten Ihnen ein besseres Angebot!
Sie haben den Artikel in den Warenkorb gelegt.. Warenkorb ansehen oder zur Kasse gehen
Die eingegebene Zahl ist falsch..