Handbuch für das QuDye dsDNA HS Kit

Dieses Kit dient der Konzentrationsbestimmung doppelsträngiger DNA mit dem Qubit™ Fluorometer. QuDye dsDNA HS Reagenz bindet selektiv an doppelsträngige DNA, sodass Nukleotide, einzelsträngige DNA, RNA, Proteine und andere Verunreinigungen keinen Einfluss auf die Messergebnisse haben. Alle Reagenzien sind für die Messungen mit Qubit™ Fluorometer optimiert, der Messbereich für die Ausgangskonzentrationen der DNA-Proben reicht von 10 pg/µl bis 100 ng/µl.

Bestandteile

Komponente Anzahl
12102
100 assays
13102
100 assays (incl. tubes)
52102
500 assays
53102
500 assays (incl. tubes)
33010, QuDye dsDNA HS Reagenz / QuDye dsDNA HS Reagent, 200x, 250 uL 1 1
B9650, dsDNA-Standard / dsDNA quantitative standard, 0 ng/ul in TE-Puffer, 1 mL 1 1
B7650, dsDNA-Standard / dsDNA quantitative standard, 10 ng/ul in TE-Puffer, 1 mL 1 1
G2150, TE‑Puffer, 20x, 5 mL 1 1
Polypropylen-Gefäß (dünnwandiges transparentes 0,5 mL) 100 500
63010, QuDye dsDNA HS Reagenz / QuDye dsDNA HS Reagent, 200x, 1.25 mL 1 1
G9650, dsDNA-Standard / dsDNA quantitative standard, 0 ng/ul in TE-Puffer, 5 mL 1 1
G7650, dsDNA-Standard / dsDNA quantitative standard, 10 ng/ul in TE-Puffer, 5 mL 1 1
N2150, TE‑Puffer, 20x, 25 mL 1 1

Bei +4 °С lagern. Reagenzien vor Gebrauch auf +20 °C temperieren.

Haltbarkeit: 12 Monate.

! Alle Messungen mit QuDye dsDNA HS Kit werden bei Raumtemperatur (22–28 °С) ausgeführt. Bringen Sie vor Arbeitsbeginn alle Komponente des Kits auf Raumtemperatur. Vermeiden Sie die Erwärmung der Proben, denn die Temperatur der Proben beeinflusst Messergebnisse, insbesondere halten Sie die Röhrchen nicht in den Händen unmittelbar vor den Fluoreszenzmessungen mit Qubit™ Fluorometer.

Verfahren

  1. Setzen Sie 1х ТЕ-Puffer an, wobei für jede Probe und jeden Standard 200 µL 1x TE-Puffer benötigt werden. Den 1х ТЕ-Puffer erhalten Sie, indem Sie 20x TE Konzentrat mit deionisiertem Wasser 20-fach verdünnen.
  2. Setzen Sie QuDye dsDNA HS Farbstoffarbeitslösung an, wobei für jede Probe und jeden Standard 200 µL Farbstoffarbeitslösung benötigt werden. Die Farbstoffarbeitslösung erhalten Sie, indem Sie 200x QuDye dsDNA HS Farbstoffkonzentrat mit 1х ТЕ-Pufferlösung 200-fach verdünnen.
    Zur Messung von 3 Proben und 2 Standards stellen Sie beispielsweise 200 μL x 5 = 1000 μL 1х ТЕ-Puffer und 1000 μL Farbstoffarbeitslösung her (legen Sie 5 μL QuDye dsDNA HS Farbstoffkonzentrat und 995 μL 1x TE-Pufferlösung vor).
    ! Die angesetzte Farbstoffarbeitslösung ist innerhalb von wenigen Stunden aufzubrauchen. Erfolgt die Messung nicht sofort, lagern Sie die angesetzte Farbstoffarbeitslösung lichtgeschützt.
    ! Verwenden Sie zur Herstellung der Farbstoffarbeitslösung ausschließlich Kunststoffgefäße. Ein Glasgefäß kann den Farbstoff adsorbieren, was zur Verringerung der Farbstoffkonzentration in den Proben und Beeinflussung der Messergebnisse führen kann.
  3. Bereiten Sie 2 dünnwandige, optisch durchlässige 0,5-ml-Röhrchen für die Standards und ein Röhrchen je Probe vor. Beschriften Sie die Röhrchendeckel (nicht jedoch die Röhrchenwand, da dies das korrekte Ablesen der Probe stören kann).
  4. Pipettieren Sie in jedes Standardröhrchen 190 µl QuDye dsDNA HS Farbstoffarbeitslösung und 10 µl dsDNA quantitative standard, 0 ng/µl (Standard #1) bzw. dsDNA quantitative standard, 10 ng/µl (Standard #2). Vortexen Sie für 2–3 Sekunden und zentrifugieren Sie kurz an.
  5. Pipettieren Sie in jedes Probenröhrchen 180–199 µl QuDye dsDNA HS Farbstoffarbeitslösung und 20–1 µl DNA-Probe (Das Endvolumen muss 200 µL betragen). Vortexen Sie für 2–3 Sekunden und zentrifugieren Sie kurz an.
    Die Verdünnung der DNA-Probe ist optional und hängt von der Ausgangskonzentration ab. Die Ausgangskonzentration für Messungen mit Qubit™ Fluorometer muss im Bereich von 10 pg/μl bis 100 ng/μl liegen. Es wird gleichzeitig empfohlen, kleine Pipettiervolumina zur Verdünnung der Ausgangsprobe zu vermeiden, um die Genauigkeit und Präzision der Messungen zu gewährleisten.
  6. Inkubieren Sie alle Röhrchen (mit Standards und DNA-Proben) für 3–5 Minuten bei Raumtemperatur.
  7. Führen Sie Fluoreszenzmessungen durch.

Fluoreszenzmessung mit Qubit™ Fluorometer

Folgende Schritte sollen gemäß der Anleitung für das Qubit™ Fluorometer durchgeführt werden. Je nach Ausführung des Fluorometers können sich Menüpunkte von den unten genannten unterscheiden.

  1. Nach dem Einschalten des Geräts wählen Sie auf dem Display des Qubit™ Fluorometers den Menüpunkt «dsDNA HS (DNA High Sensitivity)». Drücken Sie «Go».
  2. Jedes Mal nach Herstellung einer frischen Farbstoffarbeitslösung muss das Fluorometer neu kalibriert werden. Wählen Sie «Run new calibration» und drücken Sie «Go».
  3. Setzen Sie das Röhrchen mit dem Standard #1 in den Probenraum ein, schließen Sie den Deckel und drücken Sie «Go». Nach Ablesen der Messwerte (etwa 3 Sekunden) entfernen Sie das Röhrchen mit dem Standard #1. Setzen Sie das Röhrchen mit dem Standard #2 in den Probenraum ein, schließen Sie den Deckel und drücken Sie «Go». Nach Ablesen der Messwerte entfernen Sie das Röhrchen mit dem Standard #2.
  4. Nach Abschluss der Kalibrierung setzen Sie das Röhrchen mit der DNA-Probe in den Probenraum ein, schließen Sie den Deckel und drücken Sie «Go». Auf dem Display wird der QF Wert angezeigt.

Sie können die DNA-Konzentration anhand der folgenden Formel berechnen: DNA‑Probenkonzentration = QF Wert x 200/Probenvolumen oder geben Sie das Probenvolumen ins Fluorometer ein.

Related kits

QuDye dsDNA HS Kit (optimiert für Qubit®)

Für Qubit®-Fluorimeter optimiertes Kit zur Quantifizierung doppelsträngiger DNA mit hoher Sensitivität (HS) und einem Messbereich von 10 pg/µl bis 100 ng/µl
Preise einblenden
Artikel-Nr. Packungseinheit Preis Vorlaufzeit
12102 100 assays $55.00 Auf Lager
13102 100 assays (incl. tubes) $70.00 Auf Lager
52102 500 assays $255.00 Auf Lager
53102 500 assays (incl. tubes) $299.00 Auf Lager

Sie haben den Artikel in den Warenkorb gelegt.. Warenkorb ansehen oder zur Kasse gehen
Die eingegebene Zahl ist falsch..