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07/06/2020
Das LumiPure spin Miniprep-Kit für Plasmide erlaubt eine schnelle und effiziente Extraktion von Plasmid-DNA aus Escherichia-coli-Kulturen mit Hilfe von Zentrifugationssäulchen. Das Zellpellet wird resuspendiert, und die alkalische Zelllyse wird mit einer Lyselösung durchgeführt. Das Lysat wird mit dem Neutralisierungspuffer gemischt, der die selektive Bindung der DNA an die Säulenmembran bei einer hohen Konzentration an chaotropen Salzen fördert. Denaturierte Proteine, genomische DNA und SDS werden durch Zentrifugation pelletiert, und der Plasmid-DNA-haltige Überstand wird auf die Säule gegeben. Bei den nachfolgenden Waschschritten gewährleistet die spezielle Rezeptur der Waschlösungen, dass alle Verunreinigungen von der Membran zuverlässig entfernt werden. Anschließend wird die Plasmid-DNA mit Elutionspuffer oder alternativ mit deionisiertem Wasser eluiert.
Eigenschaften des Kits:
Ausgangsmaterial: Escherichia-coli-Zellen mit Plasmid-DNA
Präparationsdauer: 15 Minuten
Bindekapazität der Säule: 30 µg DNA
Typische DNA-Ausbeute: bis zu 30 µg abhängig von der Plasmidkopiezahl und dem Volumen der Bakterienkultur
DNA-Reinheit: OD260/OD280 >1,8
Die isolierte DNA eignet sich für alle gängigen molekularbiologischen Verfahren, u. a. für PCR, Restriktionsverdau, Ligation, Transformation, in vitro Transkription und Sequenzierung (Sanger- und NGS Verfahren).
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